Diabetologia：启动时但功能受损的记忆Tregs在1型糖尿病患者进展缓慢的过程中逐渐扩展

从第一次浮现人体内自身病原体到浮现1DF哮喘临床征状的重大突破赴援在孩童时期就有较好的叙述，多个人体内自身病原体白血病的孩童中都有70%在血清转成后10周内患上哮喘，而随访15年的孩童这一比例减少到84%。比起之下，占总临床1DF哮喘一半以上的DF1DF哮喘的中风机制还并未给与应有的深入研究。

愈加多的人开始常用分期系统来假定1DF哮喘的重大突破：母体在浮现多种人体内自身病原体时转入第1先决条件，浮现浓度异常时转入第2先决条件，浮现征状时转入第3先决条件。一些多发人体内自身病原体白血病的母体，在1期和2期，重大突破较比较慢，并发展为中风的1DF哮喘。我们之前叙述了一第一个大在首次扫描到多种人体内自身病原体抽取后至少10年无哮喘的极比较慢重大突破者，这第一个大病征人数少，但特征非常一致。随后，我们发现人体内自身蛋白特异性CD8+T细胞内反理应在重大突破较比较慢的病征中都理论上不存在，但在全面性中风和长期存在的哮喘病征中都很更容易扫描到。这显然表明，与重大突破病征比起，这些病征性疾病反理应的闭环增强。

早期深入研究表明，尽管闭环性T细胞内(Treg)数量长时间，但哮喘病征存在一些机制缺陷，其中都还包括对IL-2的反理应技能增高。此外，哮喘病征中都的效理应CD4+T细胞内显然对闭环突显抵抗性，表现为效理应T细胞内的依赖性移向，自然转化成的Treg和人体内转化成的其会Treg，以及蛋白经历的CD4+T细胞内中都IL-2反理应移向。本深入研究的借此是叙述了CD4+闭环性T细胞内(Treg)在一小群极较比较慢重大突破者中都的特征，他们的平均成年为43岁(31-72岁)，随访时间为18-32年。

法则：BOX深入研究是一项以老年人为基础的纵向深入研究，在21岁以下确诊的病征亲族中都检查1DF哮喘的危险因素。我们之前叙述了长期较比较慢重大突破者的特征，他们依然多重人体内自身病原体白血病超过10年，但并未浮现哮喘的临床征状，比较慢性或非顺利完成性性疾病。随后，10名之后依然无哮喘并愿意提供大量肠道抽取的较比较慢重大突破者归入T和B细胞内机制分析。在目前的深入研究中都，8名比较慢重大突破者(SP第一个大)，中都位成年43岁(31-72岁)，18 - 32岁之间的人体内自身病原体白血病。所有的组织者都处于1DF哮喘重大突破的1期，尽管一些人随后失去了人体内自身病原体对某些蛋白的白血病反理应，然而，一名病征已经处于2期至少6年，但并未浮现临床征状，一名病征被诊断为哮喘，该受试者72岁，在采集实验抽取时，其HbA1c升高到53 mmol/mol(7%)，在数据分析中都对该其会顺利完成了单独风险评估。分离外周血单个核细胞内(PBMCs)，采用多参数流式细胞内术和T细胞内依赖性试验风险评估其会中都Treg的振幅、表DF和机制。常用FlowSOM和CITRUS(聚类深入深入研究、表征和回归)顺利完成无指派聚类分析，风险评估Treg表DF。

结果：与身心健康其会比起，来自比较慢重大突破体的思绪CD4+T细胞内的指派聚类说明了，激活着的思绪CD4+ Treg振幅减少，与糖皮质激素其会的TNFR相关蛋白(GITR)理解减少有关。一名HbA1c升高的病征与重大突破较比较慢者和匹配的对照第一个大比起，Treg五音有所不同。机制已经有，与身心健康其会比起，来自较比较慢重大突破体的Treg介导的CD4+效理应T细胞内依赖性明显损坏。表现为对效理应CD4+T细胞内CD25和CD134理解的依赖性减少。

左图1 深入的表DF分析说明了，CD4+Treg亚DF在比较慢重大突破队列中都减少。由FlowSOM分解的Treg过道，聚集在来自所有其会的活着CD4+CD45RA -细胞内上。根据标识物理解深入深入研究出10个元簇:思绪T细胞内_1;思绪T cell_2;思绪T cell_3;思绪T cell_4;CD49b思绪T细胞内;HLA-DR + GITR +思绪T细胞内;寄存器Treg_1;寄存器Treg_2;寄存器Treg_3;和寄存器Treg_4。(a)常用9个不同Treg标识分解的10个元簇的MST。每个路由器都是一个炮兵部队(100个炮兵部队)，更大的元炮兵部队(10个元炮兵部队)在路由器第一个大周围上色。每个路由器中都的饼左图说明单个标识的理解级别。(b)每个元聚类的热左图，以说明了理论上标识理解。(c, d)为HD第一个大(c)和SP第一个大(d)分解左图，以及FlowSOM识别的每个元簇的覆盖层。(e-l)相比之下总质量为每个metacluster木箱线或左图(总质量> 0.05%)确定为HD和SP第一个大:寄存器Treg_2 (e),寄存器Treg_3 (f),寄存器Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +思绪T细胞内(h)、思绪T cell_1(i),思绪T cell_2 (j),思绪T cell_3 (k) n d CD49b思绪T细胞内(l)。红色左上角都是人口为120人SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon配对符号秩检验。此键适用于左图形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

左图2 常用CITRUS的预测模DF证实，Treg振幅的减少是重大突破较比较慢的标志。评定门控(a - f)和柑橘分析(g-k)比较SP组织者和匹配的HD组织者在CD4+CD45RA−T细胞内上的差异。(a)未成熟CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l群体的纪念性左图。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3富含，然后通过HLA-DR和GITR理解顺利完成分离，演示FlowSOM群体。(b) HD(黑点)和SP(星点)第一个大以及其会SP 606(红色)中都CD25+ cd127的振幅概述左图。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+门控有界的木箱线或左图;(c) HLA-DRloGITR−(寄存器Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(寄存器Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(寄存器Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+寄存器T cell)。(g - i)果树簇螺旋由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3理解强度着色，箭头突出的簇被识别为SP和HD队列之间的不同。(j)木箱线或左图说明了了在SP(星点)和HD(灰点)第一个大中都，CITRUS思绪Treg_3和Treg_4的相比之下总质量(比例)。(k)直方左图说明了每个簇的表DF(粉红色)和Treg标识相比之下理解与背景理解(粉红色);上列，寄存器Treg_3;下面正要，寄存器Treg_4。背景与所有其他簇中都标识的理解有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon配对符号秩检验

左图3 与身心健康献血者比起，重大突破较比较慢者思绪treg的GITR减少。每个思绪CD4+T细胞内元簇(思绪T细胞内_1;思绪T cell_2;思绪T cell_3;CD49b +思绪T细胞内;HLA-DR + GITR +思绪T细胞内;寄存器Treg_2;寄存器Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)扫描每个理解标识的变化。(a,b)来自HD (a)和S (b)队列的理解热左图(sp606不还包括在内)。(c,d)思绪Treg_4元簇中都所有HD(灰色)、所有SP(粉红色)和SP 606(红色)的FlowSOM GITR理解串联，说明了直方左图(c)和概述左图(d)。Wilcoxon配对符号秩和检验，p< 0.07(红色)所有其会还包括，p< 0.05(粉红色)其会SP 606和匹配的HD不还包括在测试中都。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs中都GITR理解，从评定门控，从所有HD(灰色)、所有SP(粉红色)和SP 606(红色)串联，说明了直方左图(e)和概述左图(f) *p< 0.05, Wilcoxon配对符号秩检验

左图4 来自较比较慢重大突破的CD4+ treg细胞内控制效理应CD4+T细胞内的技能增高。SP第一个大用粉红色的线或和左上角说明，HD第一个大用白色的线或和左上角说明，红色的线或/左上角说明其会sp606。常用CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T细胞内顺利完成分选。CD4+CD25−(理接收者者)被标识为CFSE, Treg按推论的比例滴定。用抗CD3 /28微珠活着化细胞内，培养3在此之后顺利完成流式细胞内术扫描。(a-d)与CD4+理接收者者相比之下理应的treg培养(免疫)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD理接收者者培养。(a,b,f) CFSE增殖(a,e)和CFSE依赖性百分比(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的依赖性百分比。常用白血病对照(激活着的响理应细胞内不含treg)计算依赖性百分比。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

左图5 效理应CD4+T细胞内对较比较慢重大突破的T细胞内活着化的依赖性更敏感。SP第一个大用粉红色的线或和左上角说明，HD第一个大用白色的线或和左上角说明，红色的线或/左上角说明其会sp606。常用CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T细胞内顺利完成分选。CD4+CD25−(理接收者者)被cfsel标识，treg按推论的比例滴定。用抗CD3 /28微珠活着化细胞内，培养3在此之后顺利完成流式细胞内术(CD25反染)和细胞内因子分析。HD Treg与HD、SP或sp606理接收者者共同培养。(a,b) CFSE增殖(a)和CFSE依赖性百分赴援(b)。(c,d) CD25依赖性百分赴援(c)和CD134依赖性百分赴援(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共培养中都的理解。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

结论：我们推断的结论是，来自较比较慢重大突破子的活着化思绪CD4+Treg在GITR理解中都给与了扩展和充沛，合理化了进一步深入研究Treg在1DF哮喘危险性母体中都的异质性的更进一步。

原文出处：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28